牛痘病毒来源的mRNA加帽酶活性亚基,可以特异性在RNA分子的5’端加上“帽子结构”。在真核生物中,该结构与 mRNA 的稳定、转运和翻译密切相关。使用酶促反应为 RNA 加帽是一种简单有效的方法,能显著改善用于体外转录、转染和显微注射的 RNA 的稳定性和翻译能力。

mRNA疫苗是当前市场关注最高的领域之一,mRNA技术在预防性疫苗、肿瘤疫苗和蛋白替代疗法等方面都将逐步有产品上市。在mRNA产品生产过程中,加帽酶是极为重要的生产原料。mRNA生产中加帽步骤所需原料占比31%,2035年预计会有10.3亿美元的市场规模。

通用生物拥有成熟完善的蛋白研发制备平台,在蛋白领域积累了大量的研发经验和专利。凭借自有原料关键技术及自主蛋白生产专利技术,平台可研发筛选稳定性、活性、产量俱佳的新型mRNA加帽酶,已建立了年产50亿人份加帽原料酶生产线,可满足mRNA加帽反应市场需求。

制备路线:

  • 1) 利用DNA随机突变技术,构建高容量酶库
    • 利用改良后的易错PCR技术,构建107pfu容量的牛痘病毒mRNA加帽酶库,为优筛选优质牛痘病毒mRNA加帽酶提供充足备选酶。通过优化反应条件,将易错PCR突变率提高至0.1%,较之原有技术,库容提高了5倍,提高获得有益突变体的概率。
  • 2) 利用荧光偏振技术,小分子与蛋白偶联技术,荧光基团标记肽核酸技术,核苷酸与肽核酸构建稳定双链技术等,建立高通量检测牛痘病毒mRNA加帽酶活性体系。
    • 利用荧光偏振技术,将牛痘病毒mRNA加帽酶活性,转化为荧光信号,实现高通量分析。
    • 利用肽核酸链与核苷酸链配对形成双链,提高了核苷酸链对酶活分析过程中各种核酸酶的耐受性,提高分析结果的可信度。

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